用柏偶超微量分光光度计测量微量体积的双链DNA

用柏偶超微量分光光度计测量微量体积的双链DNA

在许多生命科学实验室，测量超微量体积的样品中DNA的浓度是日常应用。双链DNA的定量和纯度测量是进行下列众多实室验的关键*步，如PCR，定量PCR，二代测序，染色质免疫沉淀及染色质免疫沉淀加二代测序。这些实验的成功要求双链DNA起始物质的浓度定量测量精准。另外，试剂价格高起，让开始的定量分析突显弥足珍贵。生命科学家们也需要测量灵活性，以对更高浓度和更大体积的样品进行测量。柏池125能实现高浓度测量，而传统的光度分析可实现常规体积样品的分析。

当前进行双链DNA直接测量的选项有：传统的分光光度法或专用超微量测量仪器。传统的紫可见分光光度测量法需要进行样品稀释，不但延长了定量方法的时间，而且由于多出的样品处理增加了出错的可能性。市场上现有的超微量仪器存在诸多不足，如光程可能漂移、检测精度差和污染及气泡干扰等。

为了解决这些问题，柏点研发了一套创新的超微量仪器——柏偶（BioDrop DUO+）。柏偶是一款紫外可见分光光度计，带有超微量采样点和可容纳柏池及传统比色皿的比色皿槽。采样点提升了科学家们测量超微量体积的DNA，RNA，Oligo和蛋白质样品的能力，而可选的柏池分析让生命科学家具有测量更高浓度样品的灵活性。由于柏偶光程固定，因此，可实现优异的测量性能，却无需校正。浓度可以快速通过彩色触摸屏选择机载软件中的内置方法程序获得。重要的是用户不再需要去进行耗时的样品稀释。超微量直接测量的主要应用之一是双链DNA的定量。为了展示柏偶的性能，我们进行了一系列的实验，以检验*小样品体积、检测限、重现性、线性和样品残留。

柏偶紫外可见分光光度分析

柏偶是一款分束紫外可见分光光度计，以氙灯作为光源，采用1024 CCD阵列检测器。该技术提供了快速高质量的测量。相关技术参数见下表。

柏偶快速提供测量结果：无需预热并通过高分辨率的彩色触摸屏平稳操控。样品用移液器直接加载到内置采样点上或柏池内，然后测量。

料和方法

在用柏偶测量前，纯鲑鱼精DNA (Sigma-Aldrich Item#D1626-250MG)直接用分子生物学级超纯水溶解。

在机载软件的下拉菜单中选择柏偶机载采样点0.5mm光程。或者使用柏池125时，选择相应的0.125mm光程。DNA浓度通过预置的DNA定量方法自动计算：吸光度通过230-320nm波长扫描获得；DNA浓度由260nm处的吸光度扣除320nm后乘以DNA浓度因子(50μg/mL)和光程标准化因子(内置采样点为20，柏池125为80)计算而得。

多台机器被用于测试，以确定仪器检测限、*小样品体积、线性、重现性和样品残留。代表性数据见图1-3。

检测限通过在内置采样点上用机载软件上的DNA方法进行一系列的20次测量来测定。

*小样品体积通过1μl的微量注射器进行一系列的测量来测定。通过计算平均值和标准偏差测定减少体积测量时的重现性，从而确认在可能的*小体积下测量是可靠的。

仪器线性通过以测量浓度对稀释因子绘图确定。线性以对该线进行*小二乘分析来表述。

*，样品残留由变换测量水与100 或1000ng/μl双链DNA溶液来评定。内罝采样点仅用无绒布在两次测量间简单擦拭，以评估样品测量间清洁的有效性。

柏偶测量的线性

一系列浓度的DNA通过内置采样点进行测量。每个浓度测量5次，并计算平均值，然后对稀释因子作图。对于高达2500ng/μl的样品，柏偶都展现了*的线性，如R2值所示的0.9998。R2值体现了一条直线内测量的准确度，在该直线上测量显示的线性展示的R2值位于0.9至1.0之间。

柏池125的线性也在柏偶上进行了测量。用测量浓度对稀释因子作图，获得了良好的线性，R2值为0.9997。

内置采样点对双链DNA的检测限

柏偶的双链DNA检测限是一项重要指标，检测限告之用户具有*小的检测浓度。低的检测限允许科学家们用*少的样品量进行测量，而留更多的样品用于后续实验。内置超微量采样点的检测限可重复地显示为少于1ng/μl，同类中*，如图3所示。如之前所展示，当使用柏池125时，检测限为7ng/μl。

重现性和样品测量的*小残留

通过做实验来确定双链DNA样品测量后至另一次测量的残留。仅需用无绒布简单擦拭，足以将样品残留减少到测不出的水平，如图4所示。柏池125残留检测见图5。

*小加样体积

超微量双链DNA定量测量的另一个关键要素是可加样并能获得可重现的准确结果的*小加样体积。为此，使用了一根1μl的微量注射器来加浓度为1000ng/μl的样品。图6展示出内置超微量采样点*小加样体积是0.5μl。该体积能保持*测量性能，并节省保贵的样品。

需要超微量测量的典型方法

表3列举了核酸定量后重要的下游应用。这些分析通常要求高样品浓度和，很重要的是，低样品量。

柏点Resolution软件

柏点Resolution生命科学软件是一个功能强大而又直观的电脑软件包，已经包含在柏偶的配置中。该软件有一个生命科学模块，包含了DNA、RNA、寡聚核酸和蛋白质分析方法。表4汇总了柏点Resolution软件的主要性能。

柏点也提供选配的CFR模块，用于那些需要符合21CFRpart 11规范的实验室。该版本的功能之一就是允许限制特定群组的登陆和设罝管理权限。

机载软件

单机分析的柏偶通过一块高分辨率的彩色触摸屏控制。软件提供了定量分析和定性分析功能，让分析和测量简单*。

DNA分析方法使用了波长扫描，可实现定量和纯度分析。显示下列四个波长的吸光度：

1．A230nm-此波长的吸光度反应样品污染，

如苯酚和氯仿的存在。

2．A260nm-DNA的吸收峰

3．A280nm-蛋白质的吸收峰

4．A320nm-没有分子吸收，用于背景测量

结论

柏偶是一款超微量专用仪器，相对现有仪器展示出了明显的性能提升。没有移动部件的内置采样点提供了低至1ng/μl的双链DNA检测限。*样品浓度可达2500ng/μL。使用柏池125,柏偶可拓展双链DNA测量范围至10,000ng/μL，且仅需0.6μL的样品。内置采样点使用简单，低至0.5μl的双链DNA可以直接加样，准确测量。很重要的是，正如重复进行DNA和空白水样品所展示的那样，该仪器清洁容易，从而不产生样品残留。*，柏偶易于使用，参数优越，性能超级。柏偶树立了超微量测量的卓越新标准，您再无需去校正。