Hoefer HE33水平电泳简易操作手册

HE33水平电泳简易操作手册

HE33主要用于快速核酸电泳，尤其适应于RNA电泳。

1.     制冷剂的添加（如无需制冷此步骤可省略）

准备600ml的50%冰乙二醇溶液，用50ml注射器或量筒或蠕动泵加入到电泳槽胶套中，盖上密封橡胶，然后把设备置于冰盒中待用。

2.     准备核酸电泳所需的溶液

准备跑胶buffer（250ml），loading buffer和琼脂糖溶液（7ml/mm，如制备3mm厚的胶需要准备21ml的琼脂糖溶液）

3.     制胶

按照以下图解安装跑胶盘及梳子，调节梳子合适的高度后拧紧两边的螺丝。倒入热的琼脂糖溶液，约30min胶凝固后小心的拧松螺丝再拔除梳子，拆除跑胶板（Running tray）置入预冷的电泳槽内。

4.     电泳

加入约220ml的buffer，使buffer没过胶约1mm深；上样，8孔梳子*多可上8个样品；盖上电泳盖，黑色为负极，红色为正极，注意离样品近的应插负极；接上电泳专用电源，设置合适的电流电压及时间进行跑胶。电泳结束后，拔下电极，打开盖子，用翘板分离凝胶进行下一步实验。

跑胶条件推荐：

RNA纯度鉴定：需添加制冷剂，5min，500V；

慢速电泳：分离0.1-23kb的核酸，设置电压梯度为12V/cm（150V），30-40min。

5.     清洗

每次使用后需彻底清洗，用中性洗涤剂进行清洗，然后用蒸馏水冲洗干净，本设备不适合强清洗剂及磨砂型清洗剂。

注意事项：

如设置的电压或电流较高，或跑胶时间大于20min，强烈建议加热制冷剂进行跑胶；

安装跑胶板及梳子时应小心并对其各边缘；

如需观察跑胶进度，请断电后开盖检查，跑胶盘为UV可透过材质，可用手持式UV照射仪进行观察电泳进度；

如需进行RNase酶去除处理，本设备适合用3%的H2O2及DEPC水浸泡。