紫外分光光度计基本知识

分光光度计基本知识

1、  分光光度计：在特定波长处或一定波长范围内光的吸收度，对该物质进行定性或定量分析。常用的波长范围为：(1)200～380nm的紫外光区，(2)380～780nm的可见光区，(3)2.5～25μm（按波数计为4000cm<-1>～400cm<-1>）的*光区。所用仪器为紫外分光光度计、可见光分光光度计（或比色计）、*分光光度计或原子吸收分光光度计。为保证测量的精密度和准确度，所有仪器应按照*计量检定规程或本附录规定，定期进行校正检定。

2、  分光光度计组成：仪器主要由光源、单色器、样品室、检测器、信号处理器和显示与存储系统组成。

3、  光源：钨灯光源所发出的400～760nm波长的光谱光通过分光系统分光后,可得到由红橙，黄绿，蓝靛，紫组成的连续光谱，该色谱可作为可见光分光光度计的光源；氘灯能发出185～400 nm波长的光谱可作为紫外光光度计的光源；氙灯（一般为闪烁脉冲氙灯）能发出190-1100nm波长的光谱可作为紫外可见分光光度计的光源；

氙灯VS氘灯+钨灯

-使用氙灯在紫外可见分光光度计上可以省去钨灯和相关的光学机械装置，仪器中氙灯使用功率较大而氘灯较小

-使用成本上差不多，氙灯也能做到很长寿命，两者价格也不相上下，但通常氙灯比氘灯的寿命更长

-氙灯发光的波长范围要比氘灯大，虽然范围覆盖全波长，但在紫外部分的能量一般不如氘灯，在*部分的能量一般不如钨灯，从氘灯和钨灯的能量图谱可以得知在常规应用领域氘灯及钨灯要比普通氙灯优势明显的多

-氘灯由于厂商为了自己的利润和装置上的特殊性，一般互换性很差，都做了自己特有的座子和不同的对光高度。而氙灯则通用性强多了，坏了替代品较多

4、  物质的吸收光谱：如果在光源和棱镜之间放上某种物质的溶液,此时在屏上所显示的光谱已不再是光源的光谱，它出现了几条暗线,即光源发射光谱中某些波长的光因溶液吸收而消失，这种被溶液吸收后的光谱称为该溶液的吸收光谱。不同物质的吸收光谱是不同的.因此根据吸收光谱,可以鉴别溶液中所含的物质。当光线通过某种物质的溶液时透过的光的强度减弱，因为有一部分光在溶液的表面反射或分散，一部分光被组成此溶液的物质所吸收只有一部分光可透过溶液。入射光= 反射光 + 分散光 + 吸收光 + 透过光。如果我们用蒸馏水(或组成此溶液的溶剂)作为"空白"去校正反射，分散等因素造成的入射光的损失则：入射光 = 吸收光 十 透过光

5、  光栅：是分光系统的核心元件，关系到紫外可见分光光度计整机的质量好坏、水平高低，是一个非常重要的光学元件。光栅的分光原理对于给定的光栅，不同波长的同一级主极大次极大（构成同一级光栅光谱中的不同波长谱线）都不重合，而是按波长的次序顺序排列，形成一系列分立的谱线。这样，混合在一起入射的各种不同波长的复合光，经光栅衍射后彼此被分开。

6、  单光束分光光度计：由一束经过单色器的光，轮流通过参比溶液和样品溶液，以进行光强度测量。这种分光光度计的特点是：结构简单价格便宜，主要适于做定性分析；缺点是：测量结果受电源的波动影响较大，容易给定量结果带来较大误差，此外，这种仪器操作麻烦，不适于做定量分析

7、  比例光束分光光度计：比例双光束一个光束通过样品,一个光束不放参比,结果就是*了光源误差,但没有*样品误差

8、  双光束分光光度计：以两束光一束通过样品、另一束通过参考溶液的方式来分析样品的分光光度计。这种方式可以克服光源不稳定性、某些杂质干扰因素等影响，还可以检测样品随时间的变化等

10.   带宽：紫外可见分光光度计光谱带宽即狭缝是指由一对隔板在光通路上形成的缝隙,用来调节入射单色光的纯度和强度,也直接影响分辩力.出射狭缝的宽度。通常有两种表示方法：一为狭缝的实际宽度,以毫米（mm）表示,另一种为光谱频带宽度,即指由出射狭缝射出光束的光谱宽度,以毫微米nm表示.例如,出射狭缝的宽度是6nm,并不是说出射狭缝的宽度是6nm,而是指由此狭缝射出的光具有6nm的光谱带宽.纯粹的单色光只是一种理想情况,分光光度计所能得到的“单色光”,实际上只是具有一定波长范围的谱带,狭缝越宽,所包括的波长范围也愈宽. 对单色光纯度来说,狭缝是愈窄愈好,但光的强度也就越弱,因此狭缝不能无限制地小,狭缝的*小宽度取决于检测器能准确地进行测量的*小光能量.目前达到的*小宽度为0.1nm.目前欧洲药典指定药企QC测试的带宽为1nm。