紫外分光光度计OD600校准说明

1，校正原因：

由于细胞、菌种类样品的本身不产生吸收，因此使用分光光度计测定其细胞密度实际上测定的A 值

为样品的“假吸收”。正是因为样品本身不产生吸收，因此其A 值的测定会受到仪器本身的光路的

影响。对于同一样品，不同的仪器，其光路的设计，光学器件的优劣，样品与出射狭缝的距离，光

学器件的几何位置等都会有所不同，因此其测定的“假吸收”A 值会有所不同。因此需要校正，从

而使不同仪器的*结果OD 值一致统一。

A x correction factor = OD

correction factor 为不同仪器之间测定结果的A 值的差异性校正系数。

对于测定范围为0.4OD-0.6OD 范围内的OD 值，可以不做校正使用；对于其他范围内的OD 值测定，

必要情况下可进行correction 参数校正。

2，矫正步骤（参考）（以E.coli 为例）

（1）计数板计数法

1）使用显微镜结合细胞计数板，计数，确定生长良好的E.coli 细胞的个数（一般为对数生长期），

作为标准样品。根据公式1OD=8x10（8）cell/ml，确定标准样品E.coli 的OD 值。

2）使用WPA 测定标准样品的OD 值，测10 组数据，取平均值OD1。此时的“correction”为2。

3）F1=OD/OD1

4）校正后的F2= 2 x F1

（2）更高级仪器校正

1）选择比WPA 精度更高的仪器对WAP 进行校正。

使用该仪器测定标准样品的OD。

2）使用WPA 测定标准样品的OD 值，测10 组数据，取平均值OD1。此时的“correction”为2。

3）F1=OD/OD1

4）校正后的F2= 2 x F1